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溶酶體染色試劑盒實驗前的準備工作

更新時間:2018-04-10      點擊次數(shù):1787
  染色工作液配制實驗開始前,將試劑盒內各組分從冰箱內取出,置于室溫回溫15~20min。其中X-Gal溶液C置入冰槽里等待溶化。根據(jù)以下染色工作液配方表(表1),實驗體系類型,檢測樣本數(shù),統(tǒng)一配制單次實驗需要的染色工作液總量?;靹蚝?,置入37ºC恒溫水槽里預熱,即為染色工作液。
 
  溶酶體染色試劑盒是細胞控制其生長潛能的保障機制一般含義是復制衰老(Replicative senescence,RS),指正常細胞經過有限次數(shù)的分裂后,停止分裂,此時細胞雖然是存活的,但是細胞形態(tài)和生理代謝活性發(fā)生明顯變化的現(xiàn)象。體外衰老細胞研究常用的生物學特征包括不可逆的生長停滯;)與衰老相關的β-半乳糖苷酶senescence associated β-galactosidase, SA β-gal)的活化。作為溶酶體內的水解酶,通常在pH 4.0的條件下表現(xiàn)活性。但是衰老細胞內其在pH 6.0的條件下表現(xiàn)活性,且隨著傳代次數(shù)的增加,細胞群體中表現(xiàn)衰老相關的β-半乳糖苷酶的細胞數(shù)目逐漸增加。
 
  溶酶體染色試劑盒注意事項,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,本試劑盒固定液B存在一定的腐蝕性和毒性,操作時請注意小心防護。染色液E剛剛溶解后會觀察到有沉淀,屬正?,F(xiàn)象,充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解,之后用于染色實驗。X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細胞樣品可以在 4ºC冰箱保存,但也需避免光照。細胞β-半乳糖苷酶活性強,孵育3 h即顯示陽性;細胞β-半乳糖苷酶活性弱,則需要孵育24 h。細胞染色zui長孵育時間為 24 h。細胞呈現(xiàn)藍色的部位即為衰老細胞特異性β-半乳糖苷酶活性部位。細胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應依賴于特定的pH值,不能用于細胞培養(yǎng)的CO2培養(yǎng)箱中進行染色反應。因為CO2培養(yǎng)箱中較高濃度的CO2會影響染色工作液的pH值,導致染色失敗。本試劑盒適合各種類型和規(guī)格的培養(yǎng)細胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35 mm 培養(yǎng)皿和各種孔數(shù)的細胞培養(yǎng)板,只需按照一定的比例調整工作液用量即可。
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