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當(dāng)前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > PCR&q-PCR > 核酸定量測定 > AN54L038/AN54L039Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)

Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)

簡要描述:Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)不同于常規(guī)的基于吸光度的測量,這款試劑盒可以區(qū)分dsDNA、ssDNA或RNA,有選擇性地檢測dsDNA(見圖1)。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比,該產(chǎn)品具有檢測范圍廣、高靈敏度、高特異性等優(yōu)點(diǎn)。

  • 產(chǎn)品型號:AN54L038/AN54L039
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間:2024-07-01
  • 訪  問  量:2337

產(chǎn)品分類

Product Category

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詳細(xì)介紹

品牌其他品牌貨號AN54L038/AN54L039
規(guī)格200 assays供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

Pikogreen dsDNA定量試劑盒 (超敏)

產(chǎn)品描述
  Pikogreen dsDNA 定量試劑盒(Pikogreen HighSensitivity dsDNA Quantitation Kit不同于常規(guī)的基于吸光度的測量這款試劑盒可以區(qū)分dsDNA、ssDNARNA,有選擇性地檢測dsDNA(見圖1)。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比,該產(chǎn)品具有檢測范圍廣、高靈敏度、高特異性等優(yōu)點(diǎn)。試劑盒主要包含Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution以及pre-diluted dsDNA Standards三個組分,可以在200 uL體系內(nèi)定量0.2~100 ng的dsDNA(見圖2)。此外,試劑盒還可以將其他污染物的影響降低至最小,可以耐受常規(guī)污染物例如蛋白質(zhì),鹽,有機(jī)溶劑和洗滌劑等(見表1),試劑盒不具有細(xì)胞膜通透性,沒有細(xì)胞毒性和誘發(fā)突變性,對人體安全無害。
訂購信息

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格
Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)AN54L038200 assays
Pikogreen dsDNA定量試劑盒(超敏)AN54L0391000 assays

產(chǎn)品組分

組分AN54L038AN54L039
A: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Solution50 mL250 mL
B: Pikogreen High Sensitivity dsDNA Enhancer, 100×0.5 mL2.5 mL
C: dsDNA Standards 0 , 0.5, 1, 2 ,4 ,6, 8 and 10 ng/uL dsDNA from calf thymus每組 0.1 mL8組)每組 0.5 mL8組)


運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃避光保存,有效期24個月。
使用方法

  1. 使用前,將產(chǎn)品從儲存條件下取出恢復(fù)至室溫。如果100XEnchancer儲存液出現(xiàn)沉淀,可37℃水浴溶解。每個組分應(yīng)充分震蕩或渦旋混勻、離心,以免造成不必要的試劑損耗。

  2. 每個待測樣品對應(yīng)200 μL的Pikogreen工作液。對于一個96孔板,吸取200 μL 100X Enchancer,加入到20 mL Quantitation Solution 中,渦旋混勻,配置成Pikogreen工作液,為得到最佳結(jié)果,工作液應(yīng)在1 h內(nèi)使用完畢。如果將工作液重新儲存并在24 h內(nèi)使用,結(jié)果的準(zhǔn)確性會有輕微損失。儲存過程中,增強(qiáng)液可能會出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,可以通過渦旋震蕩使其重懸。

  3. 對于每個樣品,吸取200 μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結(jié)果精確可靠,建議每個測試樣品和DNA標(biāo)樣分別做平行的3個復(fù)孔,此過程也可以使用有精確量程的移液排槍進(jìn)行。黑色的檢測板可以減少各測試樣品間的熒光干擾。

  4. 在96孔板微孔中,每孔加入10 μL的dsDNA標(biāo)樣或未知樣品,并用移液器輕輕混勻。

  5. 將微孔板室溫避光孵育5~10 min,為得到最佳結(jié)果,孵育結(jié)束后,應(yīng)立即讀取檢測板。也可以在6 h內(nèi)讀取數(shù)據(jù),但結(jié)果的精確性會有輕微損失。

  6. 使用激發(fā)波長和發(fā)射波長在485 nm和530 nm處的酶標(biāo)儀測量熒光值。

  7. 制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算檢測樣品的DNA濃度(見圖2)。
    】:圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供參考,您可以根據(jù)實(shí)際測得的數(shù)據(jù)自制標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而求算樣品的濃度。

圖1:使用Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒檢測不同類型核酸得到的相對熒光強(qiáng)度


圖2:使用Pikogreen Hig Sensitivity dsDNA 定量試劑盒制作的calf thymus DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線(Ex/Em 485/530),左上角插圖顯示了低濃度DNA樣本測定的曲線圖。

注意事項(xiàng)

  1. 對于要檢測的植物或動物來源的DNA樣本,小牛胸腺DNA(Calf thymus DNA )常常作為制作DNA標(biāo)樣的參照物。因?yàn)?/span>Calf thymus DNA具有雙鏈結(jié)構(gòu)、高度聚合,堿基分配均勻(AT含量58%,GC42%)。如果檢測樣品的熒光值超過了標(biāo)準(zhǔn)曲線,那么需要將樣品做進(jìn)一步稀釋處理。為了保持結(jié)果的一致性,務(wù)必使每孔上樣量均等,且不含有其他高濃度的污染物。
    2. Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒可以測量范圍在0.2~100 ng的dsDNA。對于一些不需要線性檢測的樣品,試劑盒檢測范圍可以擴(kuò)展至200 ng。如需檢測更低含量的樣品,您可以將DNA標(biāo)樣用1×TE緩沖液作進(jìn)一步的稀釋,濃度可以稀釋到0.02 ng/μL,然后按照常規(guī)程序每孔10 μL上樣。
    3. 對于不同種類的檢測儀器,您可以優(yōu)化儀器設(shè)置,以獲取最佳線性度。一些可能會影響最終線性度和相對熒光強(qiáng)度的因素有:(1)激發(fā)和發(fā)射波長與帶寬(2)截止型濾波器(3)靈敏度設(shè)置(4)移液的準(zhǔn)確性(5)微孔板制造商。為了得到最佳結(jié)果,請使用精確校準(zhǔn)的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測板。建議檢測時(shí)每個DNA標(biāo)樣和未知樣品都設(shè)定3個復(fù)孔。如果檢測時(shí)不只一塊96孔板,建議每塊96孔板都設(shè)定一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量減少檢測板之間的誤差。
    1:常見的DNA污染物對 Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒的影響

復(fù)合物初始濃度終濃度(200 μL結(jié)果
醋酸銨100 mM5 mMPass
醋酸鈉600 mM30 mMPass
氯化鈉200 mM10 mMPass
氯化鎂25 mM1.25 mMPass
苯*2 %0.1 %Pass
乙醇10 %0.5 %Pass
氯仿2 %0.1 %Pass
十二烷基硫酸鈉(SDS)0.2 %0.01 %Pass
Triton X-1000.2 %0.01 %Pass
牛血清白蛋白(BSA)200 mg/mL10 mg/mLPass*
dNTPs**2 mM100 μMPass
聚乙二醇40 %2 %Pass
瓊脂糖2 %0.1 %Pass

】:3dsDNA平行樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線,分別在上述含有特定濃度污染物的條件下(初始濃度進(jìn)行檢測,“Pass"指與沒有污染物的體系相比較,實(shí)驗(yàn)結(jié)果變化范圍<20%。所有樣品用Molecular DevicesGemini XS酶標(biāo)儀在485 nm處激發(fā),在530 nm處測熒光強(qiáng)度?!?/span>Pass *"指由此條件測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線有少許變動。dNTPs**"指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物。




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