簡要描述:Collagenase, TypeⅡ膠原酶Ⅱ型作用較緩和,能消化細胞間質(zhì)中的膠原纖維以釋放細胞,對細胞損傷小,是*一種可以降解具有三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維的蛋白酶。
產(chǎn)品分類
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品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AC15L141 |
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規(guī)格 | 100mg | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
應用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
Collagenase, TypeⅡ膠原酶Ⅱ型操作簡便,且與Washington LS00417X/LS004189/LS004188/LS004186等產(chǎn)品相比細胞成活率更高,詳見下文或咨詢銷售人員。
訂購信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
Collagenase, TypeⅡ膠原酶Ⅱ型 | AC15L141 | 100 mg | 450 |
保存方法
4℃保存,保質(zhì)期一年。
使用方法
1.膠原酶儲存液的配制
向每管100 mg的膠原酶中加入100 μL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平*鹽溶液,含Ca2+、Mg2+),輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,制備成1 g/mL(即1000×)的儲存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌,分裝成小份量,然后于-20℃避光凍存。
使用前于冰上解凍,避免反復凍融。其用于組織和細胞分散的常用濃度為:0.5~2.5 mg/mL,用于軟骨消化的常用濃度為1~2 mg/mL,需要根據(jù)特定的實驗條件或者參考相應的文獻資料確定所需的合適的濃度。
2.組織的分離
(1)使用無菌shoushu刀或剪刀將組織切成3~4 mm大小的組織塊。
(2)利用含Ca2+、Mg2+的HBSS洗滌組織塊數(shù)次。
(3)加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,使其浸沒組織塊,并加入膠原酶至需要工作濃度。
(4)于37℃孵育4~18 h。消化時使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補充消化可以提高消化效率。
(5)已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,收集備用。未*解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育。
(6)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次。
(7)細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞,利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。
(8)于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。
3.器官灌注
(1)向37℃預熱的含Ca2+、Mg2+的HBSS中加入膠原酶,另添加3 mM的CaCl2有助于提高分離效率。
(2)按照已優(yōu)化的速率對相應的器官灌注膠原酶工作液。
(3)將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩,從而將已解離的細胞或小片段組織塊與較大團塊分離開來,未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進一步孵育。
(4)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數(shù)次。
(5)細胞培養(yǎng)液重懸上述細胞,利用自動細胞計數(shù)器或其他方法計算活細胞密度。
(6)于細胞培養(yǎng)皿上利用合適細胞培養(yǎng)基接種細胞。
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